PRODUCT

제품소개

All in One™ PCR Cloning Kit

A-tailing, Blunt end Fragment에 최적인 Cloning Kit

옵션
  • BIOFACT

  • Description

    All in One™ PCR Cloning Kit는 PCR product의 cloning을 위한 제품으로서, All in One™ vector와 competent cell을 제공합니다. All in One™ vector는 Taq 뿐만 아니라 Pfu DNA polymerase에 의해 증폭된 모든 PCR 산물의 빠른 cloning에 적합한 제품으로서, Topoisomerase I 활성에 의해 상온에서 5분만에 Ligation이 가능합니다. BioFACT™ Competent cell은 DH5α 계열의 chemical competent cell로 heat-shock에 의한 transformation 방식에 적합한 제품입니다.

    ■ Feature
    • A-tail과 Blunt end PCR product의 cloning 
    • Topoisomerase I을 이용하여 상온에서 5분 내에 ligation
    • 2 kb 미만의 insert를 위한 cloning kit
    • 5'  - phosphorylation이 필요 없는 cloning system
    • Viable selection system (ccdB gene이 있어 self-ligated clone은 colony를 형성하지 못합니다.)

    ■ Application
    • A-tail fragment cloning
    • Blunt end fragment cloning

  • QC Data


    - For high yield
    1.  Ligation time을 1시간으로 늘리면 더 많은 형질 전환체를 얻을 수 있습니다. 
    2.  Vector와 Insert의 적당한 비율은 1 : 4 입니다. Insert size에 따라 조절하여 사용하시면 됩니다. 
    3.  Cloning 효율을 높이기 위해 Target PCR Band만 정제하여 Cloning 진행하시기 바랍니다.
    4.  PCR Product의 농도가 약하면, 반응 volume을 4㎕로 최대 사용하거나, PCR product 농축, Ligation 25℃ 1 hr 또는 16℃ overnight으로 진행하시면 효율을 높일 수 있습니다.
    5.  PCR 산물의 크기가 2 kb 이상인 경우 PCR 산물의 농도를 높여서 반응 시킵니다.
      

    - All in One™  Vector Map의 특성        
     
    * Genotype of BioFACT™ competent cell
    -  DH5α : F-80dlacZ ΔM15 Δ(lacZYA-argF), U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+), phoAsupE44-thi-1 gyrA96 relA1

    ** All in One™ vector 사용 시 적용 가능한 competent cell
    -  DH5α, TOP10, DH10B 등 대부분의 E.coli strains
    -  gyrase에 변이가 생겨 ccdB에 저항성이 있는 DB3.1 strain이나 ccdA gene을 포함하고 있는 균주는 viable selection이 불가능 합니다.

  • Document

  • Etc.

    1. ccdB gene의 경우, 작은 size의 DNA 조각이 삽입될 경우에도 발현되지 않아 cell이 자랄 수 있습니다.
    2. 제품 이상 확인이 필요할 때 vector control reaction과  transformation control reaction을 권장드립니다. 
    3. All in One Vector의 full sequence가 필요하시면 1670-5695번으로 연락주세요.
제품목록