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[Amplification] PCR용어(Tm, GC)에 대해 설명드립니다.

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작성일 2023-01-13 13:59:06 조회수 2528
안녕하세요.

바이오팩트 학술팀입니다.




• Tm값이란?

  Tm(melting temperature) : 안정한 상태의 Double strand DNA가 열 변성을 받으면 Single strand DNA로 분리되는 온도입니다. 
  Tm값이 너무 높거나 낮으면 증폭이 잘 되지 않거나 다중 밴드가 형성될 수 있기 때문에 적정한 값을 계산하여 PCR 증폭을 진행해야 합니다. 

  Tm값은 간단한 계산식으로 계산할 수 있습니다.  

  Tm(℃) = [4x(G+C)+2(A+T)]으로 계산 한 뒤 1~4℃정도 낮게 잡는 것이 가장 적합합니다.
 
  보통 PCR의 annealing 온도는 45~60℃ 이내로 설정하며, Forward, Reverse Primer의 GC값(%)이 50%에 가까우며,
  Tm 값을 서로 비슷하게 맞추는 것이 증폭 효율이 좋습니다. 




• GC값이란? 
  
  GC content(%)는 염기서열의 G, C의 함량을 의미하는 것입니다. 
 
  A, T는 이중 수소결합을 하고, G, C는 삼중 수소결합을 이루기 때문에 Target sequence에 G, C의 함량에 따라 Tm값에 큰 영향을 미치고, 
  PCR을 진행할 때 Primer의 G, C 함량에 따라 산물의 생성에 영향을 미칠 수 있습니다. 
 
  일반적으로 PCR Primer를 design 할 때 적정 GC 함량은 40~60%를 권장합니다.




감사합니다.

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