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[Cloning] All in One PCR Cloning Kit_ ccdB gene 에 대해 설명드립니다.

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작성일 2023-01-10 13:49:20 조회수 1037
안녕하세요.

바이오팩트 학술팀입니다.

고객님들께서 PCR product를 cloning하고자 하실 때 필요한 간단한 제품!

바로 자사 All in One PCR Cloning Kit (Cat no. VT201-020)입니다~!

자사 All in One PCR Cloning Kit 는 PCR product의 cloning을 위한 제품으로서, Taq 뿐만 아니라 Pfu DNA polymerase에 의해 증폭된 모든 PCR 산물의 빠른 cloning에 적합한 제품입니다.

해당 kit의 All in One Vector는 pUC origin, MCS, LacZ gene, ccdB gene, Ampr, Kanr gene 등의 특성이 있습니다.  그 중 All in One Vector의 ccdB gene에 대하여 설명드리겠습니다.


ccdB gene (Control of Cell Death)
이 중 ccdB gene (Control of Cell Death)은 E.coli gyrase 활성을 억제하여 cell을 사멸시키는 유전자입니다. 
toxin ccdB를 발현하여 박테리아를 죽이는 lethal gene으로, DH5α에서 발현을 하게 되면 cell이 자라지 않습니다. 

하지만, cloning 과정에서 ccdB gene이 target DNA fragment로 교체되거나 첨가되어 ccdB gene의 전사가 억제되면 toxin ccdB gene이 발현되지 않아
DH5α에서 cell이 자랄 수 있으며 target DNA fragment 를 포함하는 clone을 screening할 수 있습니다.

즉, Insert DNA가 삽입되면 ccdB gene의 발현이 억제되어 cell이 자라고
insert DNA 가 삽입되지 않은 clone은 ccdB gene 발현으로 자가사멸하여 colony가 자라지 않습니다.

(단, Gyrase 변이로 인해 ccdB에 저항성이 있는 DB3.1 strain이나 ccdA gene을 포함하고 있는 균주는 viable selection이 불가능합니다.)

* 작은 size의 DNA 조각이나 연결되다 만 서열이 삽입될 경우에도 ccdB gene의 기능이 억제되어 cell이 자랄 수 있습니다.

All in one Vector의 full sequence가 필요하시면 1670-5695번으로 연락주세요.

감사합니다.

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