바이오팩트

안녕하세요 학술서비스팀입니다.

Bio-Fact의 All in one vector cloning kit 사용 시 self ligation을 줄이는 방법에 대해 설명드리도록 하겠습니다.

Cloning을 진행할 때 self ligation이 많이 발생하는 이유와 줄이는 방법은 다음과 같습니다.

1. PCR product의 정제가 깔끔하게 되지 않은 경우 
 - Salt나 기타 등등 지저분한 불순물이 product에 있을 경우 vector가 잘 붙지 않아서 self ligation이 나옵니다.  완전히 깨끗하게 정제된 product를 사용하시길 바랍니다.

2. Insert의 농도가 낮은 경우
 - Insert의 농도가 낮은 경우 vector에 붙을수 있는 것이 한정적이여서 self ligation가 발생가게 됩니다.
 - vector보다 insert의 농도를 진하게 넣어주시고 처음부터 insert의 농도가 낮을 경우 총 volume 6ul ligation에서 D.W 대신 DNA의 양을 늘려서 진행하시길 바랍니다. 

3. Ligation 시간이 부족한 경우
 - Ligation 온도가 25도에서 5분을 진행하게 되있습니다. 이를 20도, 16도로 내려서 2~4시간 진행하시면 insert가 들어갈 확률이 높아집니다.
 - 단, insert에 따라 다르며 이는 insert에 따라서 set-up하기길 바랍니다. 

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